產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品描述:
SFRE Medium 199是對(duì)M199培養(yǎng)基的改良，用于原代狒狒腎(Bak)細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。培養(yǎng)基在M199培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并升高了精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸和葡萄糖的濃度，使其實(shí)現(xiàn)最大的無(wú)毒活性。SFRE 199 -2還添加了半乳糖，以避免乳酸過(guò)度積累，并使pH值在細(xì)胞延長(zhǎng)的維持期內(nèi)，保持在生理范圍。
AT090是SFRE 199-2培養(yǎng)基，含有Earle's鹽、L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。它不含胰島素，因此在使用前必須單獨(dú)添加。對(duì)于不同的細(xì)胞系，建議用戶查閱相關(guān)文獻(xiàn)，以了解細(xì)胞所需的培養(yǎng)基添加成分和生理生長(zhǎng)的需求。
培養(yǎng)基組成：
成分 mg / L
無(wú)機(jī)鹽
二水氯化鈣265.000
無(wú)水硝酸鐵0.720
無(wú)水硫酸鎂97.720
氯化鉀400.000
醋酸鈉50.000
氯化鈉6800.000
無(wú)水磷酸二氫鈉122.000
硫酸鋅七水合物0.100
氨基酸
甘氨酸100.000
羥脯氨酸10.000
L-丙氨酸25.000
L-精氨酸鹽酸鹽150.000
L-天冬氨酸30.000
L-半胱氨酸（游離堿）4.000
L-胱氨酸二鹽酸鹽43.800
L-谷氨酸75.000
L-谷氨酰胺300.000
L-組氨酸鹽酸鹽一水合物40.000
L-異亮氨酸20.000
L-亮氨酸60.000
L-賴氨酸鹽酸鹽70.000
L-蛋氨酸15.000
L-苯丙氨酸25.000
L-脯氨酸40.000
L-絲氨酸25.000
L-蘇氨酸30.000
L-色氨酸10.000
L-酪氨酸二鈉鹽116.000
L-纈氨酸25.000
維生素
鈣化醇 0.100
氯化膽堿0.500
D-生物素0.010
D-Ca-泛酸鹽0.010
DL-生育酚磷酸二鈉鹽0.010
葉酸0.010
L-抗壞血酸0.050
維生素K3 0.016
煙酸0.025
煙酰胺0.025
吡哆醛鹽酸鹽0.025
鹽酸吡哆醇0.025
視黃醇醋酸酯0.140
核黃素0.010
鹽酸硫胺素0.010
肌醇 0.050
對(duì)氨基苯甲酸（PABA）0.050
其他
硫酸腺嘌呤10.000
磷酸一腺苷1.000
三磷酸腺苷0.200
膽固醇0.200
D（+）半乳糖無(wú)水1000.000
D-葡萄糖2000.000
脫氧核糖0.500
谷胱甘肽減少0.050
鹽酸鳥嘌呤0.300
次黃嘌呤0.354
酚紅10.000
聚山梨醇酯80 4.900
核糖0.500
丙酮酸鈉150.000
胸腺嘧啶0.300
尿嘧啶0.300
黃嘌呤0.344
使用方法:
1. 將12.1g懸浮在900ml的組織培養(yǎng)級(jí)水中，持續(xù)溫和攪拌，直到粉末完全溶解。不要加熱水。
2. 加入2.20g碳酸氫鈉粉末（TC230）或29.3ml的7.5％碳酸氫鈉溶液（TCL013）用于制備1L培養(yǎng)基，并攪拌至溶解。
3. 用1N HCl或1N NaOH將pH調(diào)低所需pH值的0.2-0.3 pH單位，因?yàn)檫^(guò)濾時(shí)pH值會(huì)升高。
4. 用組織培養(yǎng)級(jí)別水將最終體積補(bǔ)足至1000ml。
5. 培養(yǎng)基過(guò)濾除菌。采用正壓而非真空將培養(yǎng)基通過(guò)0.22微米或更小的無(wú)菌膜過(guò)濾器。正壓可減少二氧化碳的丟失。
6. 根據(jù)需要，無(wú)菌補(bǔ)充無(wú)菌添加劑。將無(wú)菌培養(yǎng)基分裝至無(wú)菌容器中。
7. 將液體培養(yǎng)基保存在2-8°C，避光。
所需材料但未提供：
組織培養(yǎng)級(jí)水（TCL010）
碳酸氫鈉（TC230）
碳酸氫鈉溶液，7.5％（TCL013）
1N鹽酸（TCL003）
1N氫氧化鈉（TCL002）
胎牛血清（RM1112 / RM10432）
質(zhì)量控制：
外觀
灰白色至乳白色均勻粉末。
可溶性
12.1 g / L的透明溶液。
不含碳酸氫鈉的pH值
4.70-5.30
用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH
7.20 -7.80
不含碳酸氫鈉的滲透壓
260.00 -300.00
含碳酸氫鈉的滲透壓
300.00 -340.00
培養(yǎng)反應(yīng)
培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力通過(guò)細(xì)胞形態(tài)分析進(jìn)行定性評(píng)估，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)及對(duì)照品的比較進(jìn)行定量評(píng)估。細(xì)胞至少傳三代。
內(nèi)毒素含量
不超過(guò)5EU / ml
儲(chǔ)存和保質(zhì)期：
1.所有干粉培養(yǎng)基和制備好的液體培養(yǎng)基應(yīng)儲(chǔ)存在2-8°C，在效期之前使用。盡管按推薦條件儲(chǔ)存，個(gè)別干粉培養(yǎng)基在某些情況下可能會(huì)出現(xiàn)變質(zhì)/降解的跡象。這通過(guò)顏色的變化、外觀的變化、顆粒物的存在和溶解后的渾濁表現(xiàn)出來(lái)。
2. 不建議制備濃縮培養(yǎng)基。在濃縮培養(yǎng)基中，溶解性較差的游離堿性氨基酸和鹽復(fù)合物含量可能發(fā)生沉淀。
3. 制備好的培養(yǎng)基的pH值和碳酸氫鈉濃度是影響細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素。這也受培養(yǎng)基的量和培養(yǎng)容器體積(表面體積比)的影響。例如在大瓶如Roux瓶中，隨著相當(dāng)體積的CO2釋放，pH值會(huì)明顯上升。因此，對(duì)于每種細(xì)胞類型，必須確定pH值、碳酸氫鈉濃度、表面體積比的最佳條件。我們建議嚴(yán)格監(jiān)測(cè)pH值。如果需要，可用無(wú)菌的1N HCl或1N NaOH或充二氧化碳來(lái)調(diào)pH值。
4. 如需要，可在過(guò)濾除菌前或除菌后在培養(yǎng)基中補(bǔ)充添加劑，注意無(wú)菌防護(hù)措施。培養(yǎng)基的保質(zhì)期將取決于加入培養(yǎng)基中的添加劑的性質(zhì)。
|
貨號(hào) |
英文品名 |
中文名 |
規(guī)格 |
儲(chǔ)存條件 |
|
AT090 |
SFRE Medium 199-2 (With Earle's Salts, L-Glutamine, Galactose and Glucose, Without Sodium bicarbonate and Insulin) |
SFRE 199 -2培養(yǎng)基 |
1L, 5L, 10×1L, 20L |
2-8°C |
