產(chǎn)品詳情
miRNA熒光定量檢測(cè)服務(wù)常有兩種檢測(cè)方法
1)探針法
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
2)miRNA熒光定量檢測(cè)服務(wù)染料嵌入法
使用熒光染料SYBR或EVGreen。熒光染料可以結(jié)合到雙鏈DNA上面,當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時(shí),熒光染料可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進(jìn)行,結(jié)合的熒光染料越來越多,被儀器檢測(cè)到的熒光信號(hào)越來越強(qiáng),從而達(dá)到定量的目的。
miRNA熒光定量檢測(cè)服務(wù)
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