人白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1α的濃度。

【檢測原理】：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人IL-1α 單克隆抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的 IL-1α與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中IL-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在 450 nm 波長測定吸光度值

【主要組成成分】

主要成分

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致

【樣本要求】

  樣本類型和采集

細(xì)胞培養(yǎng)上清

 300 g 離心 10 分鐘去除沉淀物，即刻檢測, 或者分裝，-20℃以下貯存。

血清樣本

分離管分離血清。在 1000 g 離心之前，使血樣凝集 30 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或 者分裝，-20℃以下貯存。

血漿樣本

EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1000 g 離心 3 0 分鐘收集樣本。即刻檢測，或者 分裝，-20℃以下貯存。 本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本。

細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經(jīng)過驗證。

注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本。 樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃，以避免IL-1α活性的丟失。如果在 24 小時內(nèi)檢測，樣本可以 存放在 2 - 8℃。 避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢地恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準(zhǔn)備

檢測前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫。 如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶，37℃溫浴，直至結(jié)晶全部溶解。

1×洗液

吸取 20×濃縮洗液 30 ml 至 1 L 的量筒，加蒸餾水或去離子水至600 ml，輕輕混勻，避免泡 沫。 轉(zhuǎn)移至干凈瓶內(nèi)。2 - 25℃貯存，1×洗液可穩(wěn)定 30 天。

1×檢測緩沖液

 吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒，加蒸餾水或去離子水至 50 ml，輕輕混勻，避 免泡沫。 2 - 8℃貯存，1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存 30 天。

檢測抗體 稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的檢 測抗體。 注意：請在 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的檢測抗體。

 辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素

稀釋前充分混勻。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標(biāo)記的 鏈霉親和素。 注意：請在 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。

樣本稀釋

如果樣本需要稀釋，請用試劑盒提供的 1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本，用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋 細(xì)胞培養(yǎng)上清。

人白介素1α(IL-1α)標(biāo)準(zhǔn)品

用蒸餾水或去離子水重溶人白介素1α(IL-1α)標(biāo)準(zhǔn)品，重溶體積標(biāo)注在人白介素1α(IL-1α)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)簽上。輕柔 地渦旋震蕩，確保充分混勻，重溶后標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為4000 pg/ml。重溶后靜置 10 - 30 分鐘。稀釋 前充分混勻。 請使用聚丙烯管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。